吴越 1 ，颜冬梅 2 ，屠凌岚 2 ，郑晓亮 2 (1.浙江省人民医院药剂科，杭州 310014；2.浙江省医学科学院药物研究所，杭州 310013)

摘要：目的 建立催化动力学分光光度法测定常用抗肿瘤药顺铂注射液含量的方法。方法 在硫酸介质中，进行顺铂催 化溴酸钾氧化三溴偶氮氯膦的褪色反应，褪色程度与顺铂含量呈线性关系，利用催化动力学分光光度法进行测定。结果 顺铂-三溴偶氮氯膦-溴酸钾反应液的最大吸收峰在 530 nm，3~24 ng•mL1 内线性关系良好(r=0.999 1)，平均回收率为 99.3%，RSD 为 1.24%(n=3)。结论 本方法灵敏度高、操作简便快速，可用于顺铂注射剂的含量测定。 关键词：顺铂注射液；三溴偶氮氯膦；催化分光光度法；含量测定

中图分类号：R927.2；R917.102 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2011)06-0558-03

Catalytic Spectrophotometric Determination of Trace Cisplatin Injection by Tribromochlorophosphonazo

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a catalytic spectrophotometric method for determination of trace cisplatin injection.

METHODS A catalytic spectrophotometric method based on the catalytic effect of platinum on the oxidation of tribromochlorophosphonazo [3-(2, 4,6-tribromophenylazo)-6-(4-chloro-2-phosponophenylazo)-4,5-dihydoxynaphthalene-2,7- disufonic acid] with KBrO3 in acidic medium had been proposed for the determination of trace cisplatin. The fading reaction was performed directly in an aqueous solution and the optimal conditions were given. RESULTS The calibration curves were linear over the concentration range of 324 ng•mL1 and the average recoveries of cisplatin were 99.3%, the RSD was 1.24%(n=3). CONCLUSION The catalytic spectrophotometric method is simple, rapid and sensitive, and could be used for the determination of cisplatin injection. KEY WORDS: cisplatin injection; tribromochlorophosphonazo; catalytic spectrophotometer; content determination

 不对称变色酸双偶氯试剂是分光光度法测定 镧、铈、钇及钛等稀土元素和钌、铑、锇、铱及 铂等贵金属的灵敏显色剂[1-2]。铂系元素能够催化偶氮氯膦与某些氧化剂如 KIO4，KBrO3 等的褪色 反应，反应灵敏度高，操作简便快速，仪器简单， 其检出限达到 1~10 ng•mL1 ，常用于贵金属精矿和贵金属催化剂等样品中铂系元素的测定[3]。

  顺铂注射液为临床常用的抗肿瘤药，其简便 灵敏的含量测定方法的研究，有助于顺铂的合理 用药以及低毒高效铂类抗癌新药的寻找。中国药 典对注射用顺铂的含量测定采用 HPLC[4]。本实验 根据铂类元素催化溴酸钾-三溴偶氮氯膦褪色反应 的特性，建立了顺铂注射液的含量测定方法。

1 仪器和试药

   让奇G9双光束扫描型紫外可见分光光度计；电热恒温槽。顺铂(化学名顺二氨二氯 铂)对照品(昆明贵金属研究所，批号：100401- 200501，纯度：99.6%)；三溴偶氮氯膦，化学名 3-[(2,4,6-三溴苯)偶氮]-6-[(4-氯-2-膦酸基苯)偶 氮]-4,5-二羟基-2,7-萘二磺酸，华东师范大学潘教 麦教授提供。顺铂注射液(江苏豪森药业股份有限 公司，批号：100102，100601，100803，100903， 101001，101002，规格：6 mL∶30 mg)。实验所 用试剂均为分析纯，分析用水为双蒸水。

2 方法

 2.1 溶液制备

   2.1.1 对照品溶液的制备 取顺铂对照品 30 mg， 精密称定，置 10 mL 量瓶中，用 0.2 mol•L1 HCl 稀释至刻度，配制成 3 mg•mL1 对照品储备液，取 储备液 50 μL，加水 100 mL 定容，吸取 0.1 mL，用 水稀释 10 倍，得浓度为 15 ng•mL1的对照品溶液。

   2.1.2 供试品溶液的制备 取本品注射液 1 瓶， 置 10 mL 量瓶中，用 0.2 mol•L1 HCl 溶解，配制 成供试品溶液(Ⅰ)；按对照品溶液制备方法，用水 逐级稀释，配成供试品溶液。

 2.2 试验方法

  准确量取一定量的对照品溶液，加 180 μL 4 mol•L1 H2SO4，100 μL 1%三溴偶氮氯膦，蒸馏水 稀释至 2 mL 左右，然后加 100 μL 0.01 mol•L1 KBrO3，稀释至 2.5 mL，70 ℃水浴加热 20 min， 流水冷却，加 180 μL 4 mol•L1 NaOH，于波长 530 nm 下测吸光值 A530。以无催化剂空白溶液为对照， 测得褪色吸光值A。

2.3 方法考察

  2.3.1 吸收光谱 按“2.2”项下方法绘制吸收曲 线，顺铂-三溴偶氮氯膦-溴酸钾反应液的最大吸收 峰在 530 nm。

  2.3.2 介质选择和用量，褪色反应在硫酸、硝酸和盐酸介质中均可进行，因为硫酸介质中的褪色 度A 较明显且稳定性好，故实验选用硫酸为介质。 考察 60，120，180，250，300 μL 4 mol•L1 硫酸 用量，结果显示硫酸用量在 180 μL 4 mol•L1 时A 值较明显且稳定性好。

  2.3.3 试剂用量

  2.3.3.1 溴酸钾溶液 以溴酸钾为催化反应的氧 化剂，试验观察其用量(25，50，100，150，200 μL0.01 mol•L1 )对反应的影响。结果表明：随着溴酸 钾溶液用量的增大，反应速率加快，当用量达到 100 μL 0.01 mol•L1 时反应最快。若继续增加用量， 由于非催化反应速率相对加快，反而使催化反应 的相对速率降低。所以本实验选用 0.01 mol•L1 的 溴酸钾溶液 100 μL。    

  2.3.3.2 三溴偶氮氯膦用量 三溴偶氮氯膦既是 反应的还原剂，又是指示反应的指示物质，试验观 察其用量对反应速率的影响。随着用量的增大，褪 色时间变长，反应灵敏度降低。用量越少，褪色时 间越短，灵敏度越高。为了既保持较高的灵敏度又 使催化反应溶液和非催化反应溶液在适宜的吸光 度测量范围内，实验选用 1%三溴偶氮氯膦 100 μL。

  2.3.4 反应温度和时间 在选定试剂用量的前提 下，不同温度和反应时间对催化反应速度的影响 结果表明，室温下催化褪色反应几乎不能进行， 温度在 60 ℃以下时无明显反应。温度超过 60 ℃ 后，随着温度的升高，褪色反应速度加快。温度 在 90 ℃以上时，褪色反应过分迅速，颜色不稳定。 在 70 ℃水浴中，反应进行完全，吸光度恒定，且 A 值最大。

比较 70 ℃下不同水浴加热时间(10~40 min)的 褪色反应后，选择 70 ℃水浴加热 20 min，然后流 水冷却，并加与 4 mol•L1 H2SO4 等量的 4 mol•L1 NaOH 终止反应。

2.3.5 标准曲线 精密吸取对照品储备液，加水 稀释成不同浓度标准工作液，按“2.2”项下方法， 测量吸光值并绘制标准曲线，每种浓度重复 3 次， 以浓度 C(ng•mL1 )为横坐标，吸光值 A 为纵坐标， 进行线性回归分析，得标准曲线：A=0.044 2C+ 0.005 4，r=0.999 1，线性范围 3~24 ng•mL1 。

2.3.6 回收率和精密度 按顺铂注射液处方组 成，在空白辅料中加入对照品，加入顺铂分别为 处方量的 80%，100%和 120%，按工艺要求配制。 按“2.2”项下方法测定，每个浓度测定 3 份，每份重复 5 次，计算回收率，结果见表 1，低、中、 高 3 个浓度的平均回收率为 99.3%，RSD 为 1.24%。

2.3.7 离子干扰 Na，Ca，Mg，Cu，Zn，Mn， Ni，Co，Ag，Pb，Fe 和 Cr 等无机离子对此反应几乎无影响，而 Ru，Rh 和 Ir 等明显干扰测定。 因顺铂由高纯度原料铂合成，基本上不含干扰离 子，故测定前无须分离。

2.4 样品分析

 取 6 批顺铂注射液(批号：100102，100601， 100803，100903，101001，101002)，按“2.1”项 下方法制成供试品溶液，按“2.2”项下方法，记 录吸光值A530。另取顺铂对照品，同法测定，以 吸光值A530 计算，即得。同时按中国药典 2010 年版 HPLC[4]测定含量，并将两者进行比较，结果 见表 2。

表 2 顺铂注射液的含量测定结果(n=6)

Tab 2 Results of content determination of cisplatin injection (n=6)

3 讨论

    国内外文献报道[5-7]均采用 HPLC 测定顺铂注 射液的含量，色谱柱采用氨基柱，流动相采用醋 酸铵溶液-甲醇-二甲基甲酰胺体系或 0.5%的氯化 钠溶液，对仪器和色谱柱的影响比较大。本研究 采用三溴偶氮氯膦褪色分光光度法测定 6 批顺铂 注射液的含量，与中国药典 2010 年版的 HPLC[4] 测定结果一致，同时本方法灵敏度高，检测限达 到 3 ng•mL1 ，操作简便快速，为顺铂注射剂含量 测定提供了新的方法。

REFERENCES

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 [2] ZHU L Y, YIN J Y. Progress of application and research of unsymmetric bis-arylazo derivative of chromotropic acid in the analysis of precious metals and their alloys [J]. Metal Anal(冶 金分析), 2002, 22(5): 26-31.

 [3] LIU X L, KOU Z Y, LI X, et al. Using asymmetric bis(arylazo) chromotropic acid reagents to determine trace platinum metals by catalytic spectrophotometric method [J]. Chem Reagents(化 学试剂), 1997, 19(5): 294-297.

 [4] Ch.P(2010)VolⅡ(中国药典 2010 年版. 二部) [S]. 2010: 599.

 [5] XIE J L, PAN X Z, LI M X, et al. Determination of cisplatin for injection (freeze-dried) by HPLC [J]. Qilu Pharm Aff(齐鲁 药事), 2008, 27(4): 216-217.

 [6] RONALD A F, CLINTON F S. Stability-indicating highperformance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of cisplatin and 5-fluorouracil in 0.9% sodium chloride for injection [J]. J Chromatogr B: Biomed Appl, 1990, 528(2): 517-525.

 [7] ZHU K X, WANG H. Determination of cisplatin for injection by HPLC [J]. J Huaihai Med( 淮海医药), 2007, 25(4): 374-375.

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